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好消息!翌圣已完成T7 RNA polymerase的DMF备案

近日,112net永利|中国有限公司科技(上海)股份有限公司(以下简称112net永利|中国有限公司收到美国食品药品监督管理局(以下简称“FDA”)的确认函,公司递交的T7 RNA polymeraseDMF资料已被美国FDA接收,获得备案编号,完成了DMF备案如需引用DMF编号,请发邮件至marketing@yeasen.com提出授权申请,与您确认后,我们将向您提供DMF授权书。112net永利|中国有限公司更多产品正在申报美国FDA DMF备案,欢迎来电、来函咨询。统一客服电话400-6111-883


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进行FDA DMF备案的目的是什么?

DMFDrug Master File)是DMF持有者递交给FDA的存档文件内容包含用于人体的药物产品在生产加工包装和储存过程中用到的生产设施工艺流程质量控制及其所用原料包装材料等详细信息。DMF持有者向FDA递交DMF主要目的是支持用户向FDA提交的各种药品申请(一种或多种临床研究申请(IND)、创新药申请(NDA)、仿制药注册(ANDA)、出口申请、以及上述各种申请的修正和补充)。FDA对递交的DMF资料进行存档处理,以备审查。DMF持有者只需向用户提供授权书,授权FDA在评审用户的药品申请时,对所涉及的DMF进行全面考查。这样的DMF制度使药物申报者可以直接使用DMF备案编号来代替申报过程中需要提供有关原料和辅料的具体信息,节约了审批成本,提高了审批效率同时还能缩短注册周期

 

什么是T7 RNA polymerase

T7 RNA polymerase以含有T7启动子序列的双链DNA为模板,以NTPs为底物,合成与启动子下游单链DNA互补的RNA,因此,T7 RNA polymerase常应用于体外合成长转录本和短转录本双链线性平末端或5’突出末端DNA均可作为T7 RNA polymerase转录模板,因此线性质粒、PCR产物均可用作体外合成RNA的模板。112net永利|中国有限公司可为您提供GMP级别T7 RNA polymerase1 μg的模板投入量可以产生 100-200 μgRNA

 

常见问题及解决方案 

1. 转录产物产量低

模板的质量与产量密切相关,实验组产量明显低于对照组可能原因有:

实验模板中有抑制反应成分;

实验模板本身原因。

建议:

重新纯化模板;

确定模板定量以及其完整性;

延长反应时间;

加大模板投入量;

尝试其它的启动子和RNA聚合酶。

2. 短转录本产量低

转录起始片段短会抑制反应,转录产物小于100nt 时,延长反应时间至 4-8 小时或增加模板量至2ug可以提高RNA产量。

3. RNA 转录长度大于预期

如果电泳显示产物条带大于预期大小,可能原因:

质粒模板可能没有完全线性化;

有义链3’端为突出结构;

RNA存在未完全变性的二级结构。

建议:

检查模板是否完全线性化,如有必要,额外进行线性化;

选择合适的限制性内切酶,避免产生有义链3’ 端突出,或者用 Klenow Fragment T4 DNA 聚合酶补齐后,再进行转录;

使用变性胶检测RNA 产物。

4. RNA 转录长度小于预期

如果电泳显示产物条带小于预期大小,可能原因:

模板包含类似于T7 RNA聚合酶的终止序列;

模板中GC含量高。

建议:

降低反应温度(比如,30℃),有时降低温度可以增加转录长度,但会降低产量。或者尝试不同的 RNA 聚合酶进行转录;

若模板GC含量高,采用 42℃进行转录反应,或者添加 SSB 提高产量及转录长度。

5. 转录产物电泳拖尾

电泳过程中有拖尾现象,可能原因:

实验操作过程被RNase污染;

DNA模板被RNase污染。

建议:

实验过程中使用RNase-free的枪头和EP管,佩戴一次性乳胶手套和口罩,所有试剂均用RNase-free H2O配制。

 重新纯化模板 DNA

 
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产品名称

货号

规格

UCF.ME® T7 RNA Polymerase GMP-grade50U/μL

10624ES90

5000 U

10624ES97

50000 U

UCF.ME® T7 RNA Polymerase GMP-grade250 U/μL

10625ES10

10 KU

10625ES60

100 KU