您好,欢迎来到YEASEN!
400-6111-883
新闻中心
首页 > 新闻中心 > 产品速递
酵母双杂系统-蛋白互作研究的好帮手

酵母双杂交系统在1989年由Fields和Song研究并开发目前探究蛋白质-蛋白质相互作用的所有实验系统中简单灵活且高效率的方法之一。可应用于互作蛋白的筛选、蛋白相互作用的鉴定/验证,药物作用位点筛选和药物对蛋白互作影响研究等方面。

 

酵母双杂交系统优势

简单高效:构建表达载体即可实现蛋白互作研究,省去蛋白表达、纯化等步骤;

高敏感性:可满足相对较弱的蛋白互作以及瞬时发生的蛋白互作检测;

真实性优:一定程度上保留蛋白质的折叠与空间构像,最大限度接近真实生理形态;

应用广泛:可对不同组织、器官、细胞、分化阶段材料进行文库构建和筛选;

 

酵母双杂交原理

图片11.png

图片来源:维基百科

 

完整的酵母转录因子GAL4从结构上以及功能上可以划分成相对独立的两个结构域: DNA结合结构域(BD)和DNA转录激活结构域(AD)。其中BD可以识别并结合GALA的上游激活序列UAS,而AD与BD相互靠近并结合会招募转录因子,从而促进下游转录机制的进行。在酵母双杂交系统中, 表达“诱饵”(bait)蛋白的cDNA构建到含BD的载体中,表达BD-bait融合蛋白,表达“猎物”(prey)蛋白的cDNA构建至含AD载体中,表达AD-prey融合蛋白。如果bait与prey蛋白之间有相互作用并能形成蛋白-蛋白复合物,可使AD和BD彼此靠近,从而激活下游转录机制的进行。通过检测报告基因表达与否,可以获取蛋白质间相互作用的有效信息。

 

常见的报告基因表达检测方式

图片12.png

图片来源:Paiano A et al. Curr Protoc Protein Sci. 2019

功能互补:报告基因HIS、ADE、LACZ、MEL1的激活,使得酵母可在营养缺陷型培养基(缺乏Leu/Trp/His/Ade)上生长。

显色反应:报告基因表达α-半乳糖苷酶,使X-α-Gal显色底物变蓝。有时还可选择金担子素A作为进一步检测的报告因子。

通常选择功能互补和显色反应相结合的方式确保筛选到阳性菌落。

 

酵母双杂系统的应用

1. 发现新的蛋白质和蛋白质的新功能

2. 在细胞体内研究抗原和抗体的相互作用

3. 筛选药物的作用位点

4. 建立基因组蛋白连锁图。

 

相关产品推荐

产品定位

产品名称

产品货号

RNA提取

TRIeasyTM LS Total RNA Extraction Reagent 液体总RNA提取试剂(同TRIzol LS)

19201ES

MolPure® TRIeasy Plus Total RNA Kit   总RNA提取试剂盒(带离心柱)

19211ES

MolPure® Cell/Tissue Total RNA Kit  细胞/组织总RNA提取试剂盒

19221ES

MolPure® Plant RNA Kit  植物RNA提取试剂盒

19291ES

MolPure® Plant Plus RNA Kit  多糖多酚植物RNA提取试剂盒

19292ES

MolPure® Bacterial RNA Kit 细菌RNA提取试剂盒

19301ES

MolPure® Viral DNA/RNA Kit 病毒DNA/RNA提取试剂盒

19321ES

筛选底物

X-α-Gal 5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-吡喃半乳糖苷

10903ES

筛选抗生素

Aureobasidin A(AbA) 金担子素A

60231ES