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Hieff NGS® mRNA Isolation Master Kit mRNA纯化试剂盒
产品货号:12603ES24
产品规格:24 T
产品价格:¥ 616
类别:磁珠

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  • 产品信息

     

    产品名称

    产品编号

    规格

    价格/元

    Hieff NGS® mRNA Isolation Master Kit

    mRNA纯化试剂盒

    12603ES24

    24 T

    616

    12603ES96

    96 T

    2266

     

    产品描述

     

    Hieff NGS® mRNA Isolation Master Kit是翌圣生物自主研发的专门用于纯化mRNA的磁珠试剂盒。其中的mRNA Capture beads为偶联了Oligo(dT)的微米级顺磁性微球,通过与带有poly(A)尾巴的mRNA相结合,将mRNA从10 ng-4 μg完整度良好的总RNA进行分离纯化。

     

    产品组分

     

    产品组分

    组分名称

    12603ES24

    12603ES96

    12603-A

    mRNA Capture Beads

    1.2 mL

    4.8 mL

    12603-B

    Beads Binding Buffer

    1.2 mL

    4.8 mL

    12603-C

    Beads Wash Buffer

    15 mL

    60 mL

    12603-D

    Tris Buffer

    1.2 mL

    4.8 mL

    12603-E

    Nuclease-free water

    1 mL

    4 mL

     

    运输与保存方法

     

    冰袋运输。

    2-8℃保存,效期一年。避免冷冻!

     

    注意事项

     

    1.磁珠使用前务必要回温至室温,并充分混匀,否则可能影响样品的回收效率。

    2.操作过程要严格保证无RNase和核酸污染。

    3.本产品和其他试剂配套使用时,请按照具体实验说明来进行操作。

    4.想要获得好的纯化效果,需要有完整度良好的总RNA,确保RIN值在7.0及以上。

    5.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作

    6.本产品仅用作科研用途! 

     

    使用方法

     

    自备材料

    磁力架,Nuclease-free离心管。

     

    操作流程



    图片1.png 

    1 mRNA纯化试剂盒操作流程

     

    操作步骤

     

    3.1 实验前准备

    mRNA Capture Beads2-8℃取出,静置使其温度平衡至室温(约30 min)。

    3.2 样本准备

    在一个Nuclease-free PCR管中,用Nuclease-free water10 ng-4 μg总RNA稀释至50 μL冰上放置备用 

    3.3 mRNA与磁珠的结合

    颠倒或涡旋振荡混匀磁珠,吸取50 μL磁珠悬液加入50 μL RNA样品中,用移液器反复吹打6次,

    使其充分混匀。

    ② 将磁珠与RNA的混合物置于PCR仪中,65℃5 min255 min25hold,完成RNA与捕获磁珠的结合

    ③ 将样品置于磁力架中,室温静置5 min,使mRNA与总RNA分离,小心移除上清

    3.4 样本的洗涤

    将样品从磁力架上取出,加入200 μL Beads Wash Buffer重悬磁珠用移液器反复吹打6次以彻底混匀

    ② 将样品置于磁力架中,室温静置5 min,小心移除上清。

    重复上一步骤,共洗涤两次。

    3.5 mRNA样本第一轮洗脱

    将样品从磁力架上取出,加入50 μL Tris Buffer重悬磁珠,用移液器反复吹打6次以彻底混匀。

    将样品放置于PCR仪中,80℃2 min25℃holdmRNA洗脱下来。

    3.6 mRNA与磁珠的再次结合 

    ① 将样品从PCR仪中取出,加入50 μL Beads Binding Buffer,用移液器反复吹打6次以彻底混匀。

    室温孵育5 min,使mRNA结合到磁珠上。

    将样品置于磁力架中,室温静置5 min,小心移除上清。

    3.7 样本的洗涤

    将样品从磁力架上取出,加入200 μL Beads Wash Buffer重悬磁珠用移液器反复吹打6次彻底混匀,将样品重新放回至磁力架中室温静置5 min,然后吸除全部上清。

    【注】最后需要用10 μL移液器吸干净残留液体。

    3.8 mRNA样本终洗脱

    方案一用于逆转录反应。

    将样品从磁力架上取出,加入12 μL Nuclease-free water重悬磁珠,用移液器吹打6次以彻底混匀将样品置于PCR仪中80℃,2 min后,立即置于磁力架上室温静置5 min待溶液澄清后,小心吸取10 μL上清至另一新的Nuclease-free PCR管中。

    方案二用于RNA文库的构建。

    可根据相关试剂盒说明书加入相应体积的Frag/Primer Buffer,进行文库构建。

    【注】:样品可置于冰上继续进行NGS文库构建或其他分析应用(建议立即进行后续反应),也可以置于-80℃保存。

     

    HB220218