您好,欢迎来到YEASEN!
400-6111-883
Hifair® V Reverse Transcriptase 第五代耐热逆转录酶(无甘油版)
产品货号:11301ES06
产品规格:3 KU
产品价格:¥ 585.00
类别:逆转录酶

说明书下载

  • 产品信息

     

    产品名称

    产品编号

    规格

    价格

    Hifair® V Reverse Transcriptase 第五代耐热逆转录酶(无甘油版)

    11301ES06

    3 KU

    585.00

    11301ES12

    12 KU

    1952.00

    11301ES62

    120 KU

    15625.00

    11301ES75

    300 KU

    28652.00

     

    产品描述

     

    Hifair® V Reverse Transcriptase是Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase基础上通过基因工程技术得到新逆转录酶,与Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase相比,其热稳定性大幅度提高,可耐受高达60°C的反应温度,适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时,该酶增强了与模板的亲和力,适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。Hifair® V Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升,可扩增长达10 kb的cDNA

     

    产品组分

     

    组分编号

    组分名称

    产品编号/规格

    11301ES06

    (3 KU)

    11301ES12

    (12 KU)

    11301ES62 

    (120 KU )

    11301ES75

    (300 KU )

    11301

    Hifair® V Reverse Transcriptase (600 U/μL)

    5 μL

    20 μL

    200 μL

    500 μL

     

    产品应用

     

    一步法RT-qPCR;基因克隆;荧光定量。

     

    活性定义

     

    Poly(A) .Oligo(dT)为模板-引物,在37°C10 min内,将1 nmol的dTTP掺入为酸不溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。

     

    运输与保存方法

     

    冰袋运输。4°C保存。效期6个月。

     

    注意事项

     

    1. 请保持实验区域洁净;操作时需穿戴干净的手套、口罩;实验所用耗材均需保证RNase free,以防止RNase污染;

    2. 所有操作均应在冰上进行,防止RNA降解;

    3. 为保证高效率逆转录,建议使用高质量的RNA样本;

    4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。


    第一链cDNA合成操作步骤

     

    1. RNA变性(此步为可选步骤,RNA变性有助于打开二级结构,可在很大程度上提高第一链cDNA的产量。)

    组分

    使用量

    RNase free ddH2O

    To 13 μL

    Oligo (dT)18 (50 μM)

    or Random Primers (50 ng/μL)  

    or Gene Specific Primers (2 μM)

    1 μL

    or 1 μL

    or 1 μL

    模板RNA

    Total RNA: 1 ng -5 μg或mRNA:1 ng-500 ng

    65°C加热5 min,迅速置于冰上冷却2 min。简短离心收集反应液后,加入下表中的逆转录反应液,并轻轻吹打混匀。

    2. 逆转录反应体系配制(20 μL体系)

    组分

    使用量

    上一步的反应液

    13 μL

    5×Hifair® V Buffer

    4 μL

    dNTP Mix (10 mM)

    1 μL

    Hifair® V Reverse Transcriptase (600 U/μL)

    200 U

    RNase inhibitor (40 U/µL)

    1 μL

    RNase free ddH2O

    To 20 μL

    3. 逆转录程序设置

    温度

    时间

    25°C

    5 min

    42°C

    15-30 min

    85°C

    5 min

    【注】1)当使用Random Primers时,需25°C,孵育5 min;若使用Oligo (dT)18Gene Specific Primers,此步可省略。

    2)逆转录温度:推荐使用42°C。对于GC含量模板或者复杂二级结构的模板,可将逆转录温度提高至50-55°C

    3)85°C加热5 min,目的是使逆转录酶失活。

    逆转录产物可立即用于后续PCR或qPCR反应,也可-20°C短期保存,若需长期保存,建议分装后,于-80°C保存,避免反复冻融。

    逆转录酶也适用于一步法RT-qPCR,推荐25 μL反应体系,添加10-20 U逆转录酶可根据实际情况逐步增加逆转录酶用量。

     

    相关产品

     

    产品名称

    货号

    规格

    价格(元)

    Murine RNase Inhibitor(40 U/µL) 鼠源RNase抑制剂

    10603ES05/10

    2/10 KU

    216/916

    Hieff® HotStart Taq DNA Polymerase(配体法热启动DNA聚合酶)

    10110ES72/80

    250/1000 U

    186/636

    Hieff UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase(抗体法热启动Taq酶)

    10113ES60/76

    100/500 U

    216/656

    Hieff Unicon® qPCR TaqMan Probe Master Mix

    11205ES08

    5 mL

    740

    Hieff Unicon® TaqMan multiplex qPCR master mix

    11208ES08

    5 mL

    5565

    Uracil DNA Glycosylase (UDG), heat-labile 热敏UDG

    10303ES60/76

    100/500 U

    683/3083

    dUTP, 100mM Solution 脱氧尿苷三磷酸溶液(100 mM)

    10128ES72/80

    0.25/1 mL

    253/853

    dNTP Mix (25 mM each)

    10125ES72/80

    0.25/1 mL

    116/353

    Hifair® VReverseTranscriptase 第五代耐热逆转录酶

    11300ES92/93

    10000U/50000U

    1623.00/5623.00

     

    HB220105