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UCF.ME®UltraNuclease GMP-grade全能核酸酶(同Benzonase)
产品货号:20157ES25
产品规格:25 KU
产品价格:¥ 1125.00
类别:蛋白抽提

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  • 产品信息

     

    产品名称

    产品编号

    规格

    价格

    UltraNuclease(Benzonase Nuclease)全能核酸酶

    20157ES25

    25 KU

    1125.00

    20157ES50

    50 KU

    1965.00

    20157ES60

    100 KU

    3245.00

    20157ES80

    1 MU (1000 KU)

    询价

    20157ES90

    5 MU (5000 KU)

    询价

     

    产品描述

     

    UltraNuclease(Benzonase Nuclease)全能核酸酶,又称非限制性核酸内切酶、广谱核酸酶;是一种来源于Serratia Marcescen的非特异性核酸内切酶,可在链内任意核苷酸间进行切割,将核酸完全消化成2-5个碱基长度的5'-单磷酸寡核苷酸,能够在非常广泛的条件下(6 M Urea,0.1 M Guanidine HCl,0.4% Triton X-100,0.1% SDS,1 mM EDTA,1 mM PMSF)降解各种形式的(双链,单链,线状,环状,天然或变性)DNA和RNA,广泛用于去除生物制品中的核酸。

    UltraNuclease(Benzonase Nuclease)全能核酸酶经基因工程改造在Escherichia coli (E. coli)表达纯化并在GMP环境下制备,不仅可在科学研究中降低细胞上清和细胞裂解液粘度提高蛋白纯化效率及功能研究;还可以应用在病毒纯化、疫苗生产、蛋白和多糖类制药工业作为宿主残留核酸去除试剂,将宿主残留核酸至皮克(pg)级别从而提高生物制品功效和安全性;并且可以有效防止细胞治疗和疫苗研究中人外周血单核细胞(PBMC)的结团。

    UltraNuclease(Benzonase Nuclease)全能核酸酶以无菌液体酶的形式提供,储存于缓冲液(20 mM Tris-HCl pH 8.0,2 mM MgCl220 mM NaCl,50%甘油)中,无色透明液体。

     

    产品性质

     

    来源

    E. coli

    分子量(Molecular Weight)

    26.5 kDa

    等电点

    6.85

    纯度(Purity)

    99%(SDS-PAGE)

    酶活(Enzyme Activity)

    250-300 U/μL

    比活(Specific Activity)

    1.5×106 U/mg蛋白

    最适pH(Optimum pH)

    8.0(工作范围pH 6-10)

    最适温度(Optimum Temperature)

    37℃(工作范围0-42℃)

    辅助因子(Cofactor)

    1-10 mM Mg2+

    蛋白酶活性(Protease)

    阴性

    无菌检查(Sterility)

    阴性

    内毒素(Endotoxin)

    < 0.25 EU/1000 U

    宿主蛋白残留(Host protein

    < 10 ppm(μg/mL)

    储存缓冲液(Storage Buffer)

    20 mM Tris-HCl pH 8.0,2 mM MgCl220 mM NaCl,50%甘油

    活性单位定义(Unit Definition)

    在37℃,pH 8.0反应条件,2.625 mL反应体系中,在30 min内使A260吸收值变化1.0(相当于完全消化37 μg鲑鱼精DNA成为寡核苷酸)所用的酶量定义为一个活性单位(U)。

     

    运输和保存方法

     

    冰袋运输。-20℃保存,有效期1年。若是打开包装后并4℃放置超过一周,建议过滤除菌防止微生物污染。

     

    注意事项

     

    1)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
    2)本产品仅作科研用途!

     

    推荐使用条件

     

    条件参数

    最佳条件

    有效条件

    Mg2+

    1-5 mM

    1-10 mM

    pH

    8-9

    6-10

    温度

    37℃

    0-42℃

    DTT

    0-100 mM

    >0 mM

    巯基乙醇

    0-100 mM

    >0 mM

    单价阳离子

    0-20 mM

    0-150 mM

    磷酸根离子

    0-10 mM

    0-100 mM

    在最佳条件下推荐使用量及处理时间(37℃,2mM Mg2+pH 8.0

    UltraNuclease核酸酶用量(终浓度)

    处理时间

    0.25 U/mL

    > 10 h

    2.5 U/mL

    > 4 h

    25 U/mL

    30 min

     

    使用方法

    1、样本准备

    贴壁细胞:去除培养基,用PBS细胞,去除上清。

    悬浮细胞:离心收集细胞,用PBS清洗细胞,6,000 rpm 离心10 min,收集沉淀。

    大肠杆菌:离心收集菌体,用PBS清洗1次,8,000 rpm 离心5 min,收集沉淀。

    2、样品处理

    将收集到的细胞沉淀按照质量(g)与体积(mL)比1(10~20) 的比例进行裂解处理,也可通过在冰上或室温通过机械或化学方法裂解细胞(1 g细胞约为109个)

    3、酶的添加

    1)添加适量MgCl2将反应体系中的Mg2+ 浓度调整在1-5 mM范围内,将pH调整成8-9

    2按照250 Units消化1 g细胞沉淀的比例添加UltraNuclease(Benzonase Nuclease)全能核酸酶37℃孵育30min以上。也可以跟据上表中的推荐使用量自行选定添加方案,在一定范围内增加酶量,消化所需时间相应减少。

    】全能核酸酶的酶活受离子浓度、反应温度及pH等因素的影响,初次使用时建议摸索最适浓度。

    4、上清获取

    12,000 rpm的转速离心30min获得细胞裂解液上清,进行后续相关实验。

    若溶液为高盐溶液,偏酸性或者偏碱性,含有较高浓度的去垢剂、变性剂,应适当增加酶的用量或延长孵育时间。

     

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