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UCF.ME® UltraNuclease ELISA Kit全能核酸酶检测试剂盒
产品货号:36701ES59
产品规格:1 Kit(96 Tests)
产品价格:¥ 7255
类别:其他相关产品

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  • 产品信息

     

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    规格

    价格(元)

    UCF.ME® UltraNuclease ELISA Kit全能核酸酶检测试剂盒

    36701ES59

    1 Kit(96 Tests)

    7255

     

    产品描述

     

    UCF.ME® UltraNuclease(全能核酸酶),又称非限制性核酸内切酶、广谱核酸酶;是一种来源于Serratia Marcescen的非特异性核酸内切酶,可在链内任意核苷酸间进行切割,将核酸完全消化成2-5个碱基长度的5'-单磷酸寡核苷酸,能够在非常广泛的条件下(6 M Urea,0.1 M Guanidine HCl,0.4% Triton X-100,0.1% SDS,1 mM EDTA,1 mM PMSF)降解各种形式的(双链,单链,线状,环状,天然或变性)DNA和RNA,广泛用于去除生物制品中的核酸。后续也可以通过相应的方法去除UCF.ME® UltraNuclease。

    本试剂盒应用双抗体夹心酶联免疫检测(夹心ELISA)原理检测变性与非变性的UCF.ME® UltraNuclease全能核酸酶的残留,用抗UCF.ME® UltraNuclease的兔多克隆抗体包被微孔板,形成固相抗体,向固相抗体微孔板中加入UCF.ME® UltraNuclease标准品和待测样品,然后加入生物素(Biotin)标记的Anti-UltraNuclease多抗,最后加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(SA‐HRP),形成抗体+ 抗原+抗体‐Biotin+ SA‐HRP复合物,经过洗涤后加入TMB底物显色;TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色并在酸的作用下最终转换成黄色,颜色的深浅与样品中UCF.ME® UltraNuclease的量呈正相关。本试剂盒检测定量范围0.047-3 ng/mL;检测下限:23.5 pg/mL。

     

    运输与保存方法

     

    冰袋(wet ice)运输。4℃保存,未开包装的产品,一年有效。试剂打开后,有效期半年。千万不可冻存。

    配置好的试剂保存时间:1)稀释后的洗涤缓冲液和稀释缓冲液,4℃保存,有效期1周;2)标准品36701-C为液体,保存于4℃,有效期1年;3)配制好的检测抗体、终止缓冲液,4℃保存,有效期1个月。

     

    注意事项

     

    1)试剂盒需在保质期内使用完毕。

    2)禁止不同批次的相关试剂进行混用。

    3)本产品仅能够应用于检测说明书中标注的靶点抗原与样本。其它应用需经使用者设计验证后,根据结果评估使用的可靠性与准确性。

    4)本产品仅用于研究,不能用于临床诊断或治疗。

    5)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

     

    产品组分

     

    组分编号

    组分名称

    规格

    36701-A

    酶标板

    1 Plate

    36701-B

    Detection Antibody:Biotin-conjugated Rabbit Anti-UltraNuclease Antibodies

    35 μL(0.2 mg/mL)

    36701-C

    Standard: UCF.ME® UltraNuclease

    1 vial(500 ng/mL)

    36701-D

    HRP-conjugated Streptavidin

    10 μL

    36701-E

    Dilution Buffer 1

    45 mL

    36701-F

    20×Wash Buffer

    50 mL

    36701-G

    Dilution Buffer 2

    30 mL

    36701-H

    TMB

    15 mL

    36701-I

    Stop Solution

    10 mL

    36701-J

    封板膜

    5片


    使用说明

     

    一、试剂准备

    使用前所有试剂组分以及待测样本需要恢复室温。

    1×Wash Buffer配制:浓缩液平衡至室温,充分溶解,不要有结晶。混匀,取50 mL 20×Wash Buffer至超纯水中,然后定容到1 L;具体配制体积,可按照每次使用量进行配制。

    2. Detection Antibody配制:使用前10000 r离心20s,然后用Dilution Buffer 2将检测抗体稀释至工作液浓度0.5 μg/mL。

    3. HRP-conjugated Streptavidin配制:使用前10000 r离心20s,然后用Dilution Buffer 2以1:5000稀释至工作浓度使用。

    4. 标准品曲线的配制:准备8个无菌的1.5 mL离心管,按照标准品浓度依次进行标记。移取994 μL Dilution Buffer 1至标记为3 ng/ml的离心管中,其余各管移取500 μL,根据标准品储存液浓度计算3 ng/ml标准品应移取的储液体积,加至离心管中混匀,取500 μL至下一个标记浓度的离心管中,混匀,进行一系列2倍梯度稀释标品,起始最高浓度标记3 ng/mL,最低浓度为0.047 ng/mL,可按照下面的配制方法来进行。每次试验均需制备相应的标准曲线,不同试剂盒以及不同时间的标准曲线不能混用。样本测试时,每个孔所需标品量为100 μL,注意配制体积要高于所需体积,避免体积使用量不足。

    1 UCF.ME® UltraNuclease标准品体系配制(酶标仪检测0.047-3 ng/mL)*

    Vial

    Dilution Buffer 1(μL)

    500 ng/mL UCF.ME® UltraNuclease标准品体积(μL)

    标准品终浓度(ng/mL)

    A

    994

    6

    3

    B

    500

    500 A

    1.5

    C

    500

    500 B

    0.75

    D

    500

    500 C

    0.375

    E

    500

    500 D

    0.188

    F

    500

    500 E

    0.094

    G

    500

    500 F

    0.047

    H

    300

    0

    0=Blank

    二、实验方法

    使用前所有试剂组分以及待测样本需要恢复室温。强烈建议所有的标准品和待检样本进行双复孔测定。

    1.试剂准备:备好各种待测试剂、稀释好的标准品和待测样本。

    2.标条确定:计算待测样本和标准品所需酶标条,将酶标条从铝箔袋取出,剩余的酶标条放回铝箔袋中并封好袋口,低温保存。

    3.清洗酶标板:用1×Wash Buffer(300 μL/孔)洗板三次,拍干酶标板。洗板对试验结果有重要影响,确保最后一次拍板没有洗液残留。

    4.孵育样本:加入标准品和待测样本,100 μL/孔,确保15 min内完成点样,37℃孵育1 h。

    5.清洗酶标板:弃去孔中液体,加入1×Wash Buffer(300 μL/孔)洗板五次,拍干酶标板。

    6. Biotin-conjugated检测抗体孵育:将预先配制至工作浓度的检测抗体加入酶标板中,100 μL/孔,37℃孵育1 h。

    7.清洗酶标板:弃去孔中液体,加入1×Wash Buffer(300 μL/孔)洗板五次,拍干酶标板。

    8. HRP-conjugated Streptavidin孵育:将预先配制至工作浓度的偶联HRP亲和素加入酶标板中,100 μL/孔,37℃孵育40 min。

    9.清洗酶标板:弃去孔中液体,加入1×Wash Buffer(300 μL/孔)洗板五次,拍干酶标板。

    10.显色:使用前10 min将底物液恢复至室温,将底物液TMB加入酶标板中,100 μL/孔,37℃避光孵育15 min。

    11.终止:加入50 μL/孔终止液至酶标板中,轻轻震动酶标板至显色均匀。

    12.读值:20 min内读取450 nm的光吸收值。

    二、结果分析

    1. 如果待测样本OD值超出标准曲线最高点OD值,需将样本进行稀释后重新测定。

    2. 曲线制定:根据UCF.ME® UltraNuclease全能核酸酶标准品的吸光度(减去标准品中空白孔的OD值即最终的读数,也可以不用减去空白孔的OD值)采用二次曲线回归拟合,绘制标准曲线(X-标准品浓度ng/mL;Y-最终的OD450 nm),推荐使用ELISACalc.exe回归/拟合计算软件。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品中全能核酸酶浓度。


    附件1:标准品配置流程简图

    image.png 

    附件2:示例数据

    以下标准曲线图仅供参考,应以同次实验标准品所绘标准曲线计算标本含量

    image.png 


    附件3:实验步骤流程简图

    image.png


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    名称

    货号

    规格

    UCF.ME® UltraNuclease 全能核酸酶

    20156ES25

    25 KU

    20156ES50

    50 KU

    20156ES60

    100 KU

    UCF.ME® UltraNuclease GMP-grade全能核酸酶

    20157ES25

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    20157ES80

    1 MU (1000 KU)

    20157ES90

    5 MU (5000 KU)

     

    HB210907