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400-6111-883
RT-LAMP pH Sensitive Dyestuff Kit
产品货号:13906ES65
产品规格:100 T
产品价格:¥ 1795.00
类别:等温扩增

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  • 产品信息

     

    产品名称

    产品编号

    规格

    价格(元)

    RT-LAMP pH Sensitive Dyestuff Kit

    13906ES65

    100 T

    1,795.00

    13906ES80

    1,000 T

    15,795.00

    13906ES92

    10,000 T

    135,795.00

     

    产品描述

     

    本产品将LAMP可视光染料整合到buffer中,buffer中含dATPdCTPdGTP和dUTP等Bst II DNA Polymerase扩增必须的组分同时包含pH 敏感指示剂,试剂盒含有无甘油Bst II DNA Polymerase、UDGase、RT enzyme等,可用于冻干反应体系的配制;同时减少了加样操作,降低操作误差,在极大程度上抑制假阳性反应,提高检测的准确度。本试剂盒具有较高的扩增效率和灵敏度,扩增结果可肉眼判断,阳性反应孔为橙黄色,阴性反应为洋红色,反差极大。

     

    产品组分

     

    组分编号

    组分名称

    产品编号/规格

    13906ES65 (100 T)

    13906ES80 (1,000 T)

    13906ES92 (10,000 T)

    13906-A

    2.5×pH Sensitive Reation Buffer

    1 mL

    10 mL

    100 mL

    13906-B

    无甘油RT酶Mix

    30 μL

    300 μL

    3 mL

    13906-C

    无甘油Bst酶

    50 μL

    500 μL

    5 mL

     

    运输保存方法

     

    Part I:组分13906-A【2.5×pH Sensitive Reation Buffer】干冰运输,-20°C保存,有效期6个月。

    Prat II:组分13906-B\C【无甘油RT酶Mix\Bst酶】冰袋运输,4°C保存,有效期6个月。

     

    注意事项

     

    1. 使用本试剂前请仔细阅读说明书。

    2. 整个实验,应规范操作,包括反应体系的配制、样本处理及加样。

    3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

     

    使用方法

     

    1. 待检样本准备

    核酸提取后样本:直接作为模板,加入反应体系中。

    煮沸法:临床采集的拭子样本直接放入水中,置于95°C水浴锅或金属浴中进行5 min的热裂解,释放核酸,混匀后即可作为模板加入反应体系中。

    】:1)处理样本的试剂不能使用强酸或强碱的核酸释放剂,若必须使用,则样本处理完后,需将样本的pH调节至8.0。

    2)加入的样本中,避免使用Tris-HCl等高浓度的缓冲体系,避免pH指示剂不能发生变色,影响实验结果判读。

    2. 反应体系

    A组分从-20°C取出,溶解后颠倒混匀,瞬时离心确保所有液体落到管底。根据待检测样品量,配制如下体系(通常实验需要设置阴性对照和阳性对照):

    组分

    单次反应体积μL

    终浓度

    2.5×pH Sensitive Reation Buffer

    10

    1× 

    Bst酶

    0.5

    0.32 U/µL

    RT酶Mix

    0.3

    -

    10×Primers 2

    2.5

    1× 

    模板3

    10 ng-1 µg

    -

    加ddH2O至

    25

    -

    】:

    1)阴性对照推荐设置空白(不加模板)对照以及NTC(一般为水)对照。

    2)10×Primers16 µM FIP/BIP2 µM F3/B34 µM Loop F/B each

    3)模板加入量在1-8 µL内调整推荐模板RNA溶解于DEPC水中

    3. 加样

    1如果反应是在水浴锅中进行,则每管加入20 μL矿物油(自备),以防止液体蒸发导致结果的误差。如果反应是在PCR仪中进行,不需要加矿物油(请开启热盖)。

    2)为避免污染,建议用户在超净台中配制组分,在其他房间的通风橱中加入模板以免出现假阳性结果。

    3由于本试剂使用的是pH指示剂法,该试剂中的缓冲液能力较弱,试剂不可长期接触空气,否则会吸附空气中的二氧化碳致使试剂变酸,导致试剂颜色变浅,影响实验结果判读。

    4. 反应条件

    温度

    时间

    作用

    25-37°C

    2-5 min

    降解含U模板

    60-65°C

    30 min

    恒温扩增

    85°C

    5 min

    失活

    】:

    1)本试剂盒所用酶对温度非常敏感,强烈建议使用PCR仪操作;如用水浴锅,应先加热使其达到规定温度后再反应。温差超过2°C,将导致扩增效率降低,使阳性反应无法在说明书规定的时间内洋红色变成橙黄色。

    2)反应温度需要根据引物的Tm值进行调整。

    3)反应时间依据模板浓度而定,低浓度模板可能需要60 min时间才能有比较明显的反应。

    5. 结果判断

    反应30 min后,立刻取出反应管,待降温至室温后,置于光线良好的环境中观察(建议以白纸作为背景)。如反应液为洋红色,则为阴性结果;如反应液为橙黄色则为阳性结果。

    【注】:反应的时间必须准确计时,超过说明书规定的反应时间可能会出现假阳性。反应管不可开盖,否则会污染,影响后续实验。

     

    HB220518